J Exp Med：酪氨酸单核苷酸转移酶（NNT）通过维持Fe-S蛋白功能而调节NSCLC线粒体代谢

人类心肌梗塞表现不止强大而多样的肝细胞核人体内，也许是由肠胃组织的高硫适度致使的。由于活适度硫(ROS)的分解成是这种人体内的副催化反应当，因此须要要以烟N-胺核糖二氨基盐酸氨(NADPH)的形式来降低分解应当激，以应当对这种肝细胞核活适度的强化。烟N-胺单氨基盐酸转移转移酶(NNT)可通过NADPH的分解成来可维持肝细胞核的抗分解并能，但其在非小肝细胞心肌梗塞(NSCLC)之前的效用已经确实。本研究成果推断不止NNT的隐含在心肌梗塞豚鼠假设之前引人注意强化了的形成和侵袭适度。另以外，进一步研究成果推断不止NNT局限适度时会尽量避免肝细胞核功能适度障碍，这与分解应当激的大量降低也就是说，而是以铁硫肽的活适度降低为logo。这些缺点与NADPH的有效适度和ROS的积聚有关，这指不止NNT在缓解这些决定性肽辅因子的分解之前起着决定性效用。

科学自适应当

许多常见的心肌梗塞豚鼠假设是运用C57BL6/J豚鼠的养策略而建立。引人入胜的是，这些豚鼠携带纯合以外显子7-11的框内局限适度以及肝细胞核之前Nnt序列的错义突变尽量避免非功能适度肽的隐含。因此，可以运用这种自然局限适度的性状(NntΔex7-11)来赞扬NNT对心肌梗塞牵涉到的负面影响。

首先，运用于Kras突变(LSL-KrasG12D/+)造成的心肌梗塞假设来探测Nnt隐含对心肌梗塞牵涉到的负面影响。携带Cre改组转移酶的腺病毒性LSL-KrasG12D/+豚鼠，可效用于KrasG12D在肠胃上皮之前的隐含和肠胃胰脏的形成。运用LSL-KrasG12D/+豚鼠和C57BL6/J豚鼠发情期消除Nnt+/+隐含豚鼠或NntΔex7-11/Δex7-11隐含豚鼠(三幅1A-1B)。该假设之前Nnt的隐含尽量避免Cre改组转移酶诱发的节省成本加快3个月末(三幅1C-1D)。然后，运用Kras突变与p53局限适度同时隐含(LSL-KrasG12D/+；Trp53flox/flox，也专指KP)建立心肌梗塞假设。Nnt的隐含未彻底改变Cre效用于的KP豚鼠的%-(三幅1E)。引人入胜的是，在这个假设之前，p53的局限适度消除了Nnt隐含对心肌梗塞形成的负面影响，并且无论Nnt隐含如何，科学实验最后都存在引人注意的节省成本(三幅1F)。心肌梗塞节省成本比重的比对在多种不同表现型豚鼠之间未关联性(三幅1G-1H)。

虽然多种不同表现型豚鼠之间的节省成本未关联性，但确实通过观察到假设之前侵袭适度的关联性。我们推断不止Nnt+/+豚鼠之前51.3%的为3级(胰脏)或以上，而NntΔex7-11 / +和NntΔex7-11 /Δex7-11豚鼠之前差不多36.5%和38.8%的是管理人员(三幅1I)。Nnt+/+豚鼠牵涉到4级的频率相当大降低，断定了侵袭适度的彻底改变(三幅1J)。总之，这些数据指不止Nnt倡导了心肌梗塞的牵涉到和侵袭。

2 NNT的局限适度不负面影响肝细胞核之前硫硫还肽(TXN)的抗分解基本概念

为了进一步比对NNT对心肌梗塞药理学的负面影响，首先比对shRNA冲击NNT肽的隐含，包括4个隐含NNT肽的NSCLC肝细胞系 (A549, H1299，H2009和PC9)和不隐含NNT肽的H441肝细胞(三幅2A)。冲击NNT肽隐含减缓NSCLC肝细胞的凋亡并能(三幅2B)。并且推断不止慢病毒性4过后NNT的降到降低了H2009和PC9肝细胞的生存并能(三幅2C)。此以外，H441肝细胞的凋亡不受NNT的负面影响。

通常认为NNT有助NADPH的转化成并能，从而可维持肝细胞核肽抗分解系统时会处于转化成精神状态(三幅2D)。冲击NNT降低了H1299、H2009和PC9肝细胞之前NADPH: NADP+的比重 (三幅2E)。慢病毒性4过后肝细胞核之前H2O2相当大降低(三幅2F)，所以NNT对H2O2止血更进一步很极为重要。

为了考虑到这些肝细胞核ROS的降低到底与肝细胞核抗分解系统时会有关，于是运用Western blotting比对肝细胞核之前过分解物肽3(PRDX3)的分解精神状态。H2O2通过PRDX3止血，即一对半胱氨盐酸赖氨酸效用于PRDX3形成小分子，并且才会通过TXN转化成这些半胱氨盐酸赖氨酸才能转化成PRDX3的抗分解功能适度。PRDX3小分子的积聚是PRDX3分解的logo，是肝细胞核分解应当激的常用logo物。

奥拉姆芬是一种TXN转化成转移酶(TRXR)减缓剂，虽然奥拉姆芬的化疗时会尽量避免PRDX3肽大量分解，但NNT的局限适度并未降低PRDX3的分解(三幅2G)。此以外，NNT的局限适度也未降低肝细胞核TXN2或TRXR2的肽技术水平。总之，这些结果指不止NNT在NSCLC表征并能上发挥极为重要效用，但NNT活适度的丧失并不一定时会损害肝细胞核TXN抗分解系统时会，也不时会造成引人注意的分解应当激。

3 NNT的局限适度时会损害肝细胞核的分解并能

鉴于NNT在IMM之前的定位及其负面影响凝胶上中子变化率和转化成并能，于是试三幅概述NNT对肝细胞核分解人体内到底极为重要。首先，运用于海马肝细胞以外变化率比对仪完成肝细胞核受压试验之前，比对NNT局限适度对一般肝细胞核分解功能适度的负面影响。结果推断不止NNT局限适度肝细胞的耗硫量(OCR) 随肝细胞核减缓剂的依次引导而被减小(三幅3A)。值得注意的是，NNT局限适度肝细胞的小得多排便并能在不也就是说非效用力排便的只不过相当大降低(三幅3B)。这指引肝细胞核分解缺点与NNT对中子局部的负面影响也就是说。鉴于NNT局限适度引人注意负面影响排便并能，于是探测NNT局限适度的H441肝细胞到底比NNT隐含肝细胞较强愈来愈少的分解和愈来愈强的糖酵解并能。这暗示这些肝细胞在未NNT的只不过也许通过肝细胞核NADPH来源而可维持肝细胞核的功能适度。

肝细胞核的分解人体内也就是说ETC的功能适度，ETC由特异适度电子引导的Fe-S肽核酸构成。考虑到Fe-S肽核酸的过氧化物更进一步须要要NADPH，于是研究成果NNT冲击后肝细胞核排便功能适度的降低到底与Fe-S肽涉及。肝细胞核受压试验之前可以对排便功能适度完成一般适度的比对，但不可以对单个ETC核酸成分完成比对。因此，编者完成了愈来愈为专业人士的科学实验来比对Fe-S肽依赖的排便涉及核酸(I, II, III)。结果推断不止，基于核酸I(盐酸和苹果盐酸)的摄取，在NNT冲击后核酸I-III的活适度相当大降低(三幅3C)。此以外，NNT缺点肝细胞引人注意降低了柠檬盐酸的OCR，指不止降低了柠檬盐酸脱氢转移酶(SDH)活适度和核酸II-III流量(三幅3D)。尽量避免这一物理现象的极为重要原因是SDH在ETC和TCA气化之前发挥作用双重角色。

除了通过ETC可维持磁适度量以外，Fe-S肽还可维持对分解人体内至关极为重要的其他肽转移酶的功能适度。为了考虑到NNT到底参与其他Fe-S肽的功能适度，编者比对了TCA气化之前Fe-S肽——顺乌头盐酸转移酶(ACO2)的活适度。结果推断不止冲击NNT相当大降低了NSCLC肝细胞系之前ACO2的活适度(三幅3E)。ACO2活适度的降低也许时会冲击TCA气化，进而减小驱动ETC流量的转化成适度微粒的分解成。为了必需非小肝细胞心肌梗塞之前ACO2功能适度的比对，于是赞扬Nnt隐含对KP心肌梗塞之前ACO2活适度的负面影响。结果指不止，Nnt+/+豚鼠之前Aco2活适度引人注意高于NntΔex7-11/+ 和NntΔex7-11/Δex7-11之前的，缺乏Nnt的表现不止下限的活适度(三幅3F)。

4 以外源适度NADPH在NNT局限适度后可维持Fe-S肽功能适度

为了考虑到与冲击NNT涉及的肝细胞核Fe-S肽功能适度的降低到底与NADPH:NADP+的降低有关，我们试三幅提供一种肝细胞核NADPH的以外源适度来源。为了解决问题这一目标，我们选择了蜂蜜肝细胞核之前NADH激转移酶pos5p，它可以氨化NADH而消除NADPH。虽然pos5p以前在芽孢之前也有以外源隐含，但据我们所知，pos5p还未被引入哺乳动物系统时会。为了探测我们到底能够小得多限度在人类NSCLC肝细胞的肝细胞核之前隐含pos5p肽，我们对蜂蜜肽完成了标记，使其构成HA-tag。Western blot得出，在H1299、H2009和PC9肝细胞的肝细胞核之前顺利隐含了HA-tag上标的pos5p肽(三幅4A)。选择这些肝细胞系是为了比对pos5p修复和NNT局限适度涉及的Fe-S肽缺点的并能，推断不止冲击NNT后对它们致使很愈来愈为严重的负面影响。

pos5p的隐含起死回生了肝细胞之前冲击NNT后造成的NADPH: NADP+比重的减小(三幅4B)。这与隐含pos5p肝细胞之前pos5p扰后排便链多样活动的减小有关(三幅4C和4D)。此以外，pos5p的隐含只不过起死回生了NNT冲击后ACO2活适度的降低(三幅4E)。总之，这些数据指不止可维持NNT隐含局限适度时NADPH的技术水平可以保护措施NSCLC肝细胞之前Fe-S肽的功能适度。

5 NNT的局限适度不时会冲击Fe-S肽的过氧化物

考虑到肝细胞核以外源适度NADPH能够消散NNT局限适度涉及Fe-S肽的缺点，并且NADPH是高效可维持Fe-S肽过氧化物的必备条件，因此我们接下来试三幅考虑到NNT活适度到底可维持这一更进一步。Fe-S肽过氧化物牵涉到在一个由半胱氨盐酸脱硫转移酶(NFS1)和Fe-S脚架肽(ISCU)构成的多肽核酸之前。核酸之前任何一种成分的局限适度都时会负面影响过氧化物，并且也与肝细胞核缺点涉及。因此，我们冲击NFS1或ISCU隐含来研究成果冲击Fe-S肽过氧化物后对排便链和ACO2的负面影响。

在H2009肝细胞之前，冲击NFS1后相当大降低盐酸/苹果盐酸自由基和柠檬盐酸自由基之前排便链核酸I-III的活适度，而在PC9肝细胞之前只有核酸II-III活适度被引人注意降低(三幅5A和5B)。另以外，两个肝细胞系之前，在盐酸/苹果盐酸和柠檬盐酸的效用下，冲击ISCU隐含后相当大消散了OCR(三幅5A和5B)。并且冲击NFS1或ISCU后相当大降低了肝细胞系之前ACO2活适度(三幅5C)。引人入胜的是，NNT冲击后所造成的缺点与Fe-S肽过氧化物所须要微粒致使的缺点是同等极为重要的(三幅5A-5C)。

为了断定Fe-S肽缺点对NSCLC肝细胞的肝细胞核人体内有功能适度适度负面影响，我们对冲击NNT或ISCU肝细胞完成基于液相色谱-高分辨质谱(LC-HRMS)的人体内组学研究成果。 对这些肝细胞TCA气化的人体内物完成比对，得出大多数之前间催化反应当的同位素牵涉到了相当大彻底改变(三幅5D)。这些都指不止了分解人体内的愈来愈为严重冲击和Fe-S肽功能适度缺点的一致适度。具体地说就是冲击NNT和ISCU隐含后，盐酸、苹果盐酸和富马盐酸被耗用。NNT局限适度肝细胞之前的柠檬盐酸技术水平被耗尽，但冲击ISCU肝细胞之前并未此结果。另以外，冲击ISCU肝细胞之前柠檬盐酸大量积聚，而在NNT局限适度肝细胞之前则不存在此物理现象(三幅5D)。

除了Fe-S肽ACO2和SDH以外，TCA气化还也就是说另一种肝细胞核Fe-S肽——SAM盐酸合成转移酶(LIAS)的功能适度。LIAS对于SAM盐酸的合成以及极为重要SAM盐锂烷基的共轭都非常决定性，SAM盐锂烷基由PDH (E2)和α-酮戊二盐酸脱氢转移酶(二氢SAMN-胺S-宝石N-转移转移酶，DLST)构成。LIAS对Fe-S肽过氧化物的冲击特别引人注目，因为其Fe-S簇在催化更进一步之前被转化成，这就要求不断地完成肽交换。事实上，冲击NFS1和ISCU隐含时会大量减小PC9肝细胞之前PDH-E2和DLST的脂化，然而冲击NNT对肽脂化无负面影响(三幅5E)。总的来说，这些数据指不止，NNT激起转移酶和人体内缺点，它们的缺点与Fe-S肽过氧化物的冲击涉及，但NNT不也许直接负面影响这一更进一步。这反映不止冲击NNT和ISCU后对TCA气化消除类似但又多种不同的负面影响。

6 NNT的局限适度冲击胺基盐酸人体内

除了耗用TCA气化以外，NNT缺点肝细胞的LC-HRMS人体内组学比对指不止胺基盐酸人体内失调。冲击NNT倡导长链碳水化合物N-基糖类的大量积聚，而长链碳水化合物N-基糖类是胺基盐酸β-分解的底物(三幅6A)。鉴于在NNT缺点肝细胞之前存在排便系统时会缺点，我们推测这些N-基糖类的降低是由于胺基盐酸分解减小。我们推断不止在H1299和PC9肝细胞之前OCR与椰子盐锂的分解有关，冲击NNT后OCR降低(三幅6B)。我们还通过观察到NNT缺点肝细胞之前饱和胺基盐酸和不饱和胺基盐酸以以外大量积聚(三幅6C)。胺基盐酸合成须要要耗用大量NADPH，而且NNT冲击后NADPH的有效适度降低，于是我们认为这些胺基盐酸技术水平的降低是由于以外源适度胺基盐酸摄入的降低。另以外，我们推断不止，NNT缺点肝细胞强化了对荧光椰子盐酸小分子的吸收并能(三幅6D)。为了赞扬NNT冲击后胺基盐酸的积聚到底是一个潜在的长期性，我们运用于饱和胺基盐酸椰子盐酸酯诱发NNT缺点肝细胞24时长，推断不止NNT冲击后使H1299和H2009肝细胞对椰子盐锂引人注目(三幅6E)。此以外，NNT冲击后相当大减少了H1299和PC9肝细胞对单一不饱和胺基盐酸油盐锂的引人注目适度(三幅6F)。鉴于以外源适度胺基盐酸必需的有害负面影响，我们预期肝细胞以外肝细胞耗用将保护措施NNT的局限适度。令人惊讶的是，培养基之前的肝细胞耗用加剧了NNT的降到(三幅6G)。愈来愈极为重要的是，NNT冲击后肝细胞以外肝细胞缺少时会降低NADPH的耗用(三幅6H)，这指不止在缺乏以外源适度胺基盐酸的只不过被迫合成胺基盐酸，使NNT缺点肝细胞之前NADPH的有效适度降低。总的来说，这些数据指不止NNT也许在调节胺基盐酸人体内之前起极为重要效用，NSCLC肝细胞的胺基盐酸人体内紊乱也许是一个可运用的缺陷。

7 NNT局限适度后肝细胞核类似物过分解氢转移酶(MitoCatalase)起死回生Fe-S肽功能适度

Fe-S肽对分子硫和愈来愈多有害微粒的分解非常引人注目。虽然我们未通过观察到肝细胞核肽抗分解系统时会的分解精神状态牵涉到彻底改变，但这并不一定回避NNT冲击后激起的肝细胞核ROS足够将这些引人注目适度辅因子分解。为了探究这种也许适度，我们运用于了肝细胞核类似物的过分解氢转移酶(MitoCatalase)来强化肝细胞核的抗分解并能。我们顺利地在H1299、H2009和PC9肝细胞之前过隐含了MitoCatalase (三幅7A)。MitoCatalase的隐含也部分消散了NNT冲击后涉及肝细胞核之前H2O2的消除(三幅7B)。这与NNT冲击后排便链多样活动的减小一般来说应当(三幅7C和7D)。另以外，MitoCatalase的隐含恢复NNT冲击后ACO2的活适度(三幅7E)。综上所述，这些数据指不止，减少肝细胞核止血H2O2的并能可以尽量避免NNT冲击后Fe-S肽牵涉到缺点，从而使NNT在尽量避免Fe-S肽牵涉到分解多方面发挥效用，但对Fe-S簇的过氧化物无效用。

结论

总之，我们的研究成果指不止，NNT对心肌梗塞药理学较强极为重要意义，主要是通过调控Fe-S肽而倡导肝细胞核人体内。与常规赞扬NNT功能适度的研究成果多种不同，我们描述了NNT对NSCLC之前肝细胞核分解转化成参量的微妙负面影响。在NSCLC之前，NNT活适度也许缓解了大量分解人体内造成的分解应当激自由基。我们的推断不止进一步指不止了肝细胞核人体内在心肌梗塞牵涉到之前的必要适度，暗示肝细胞核功能适度的强化也许是心肌梗塞化疗的一个极为重要靶点。转移酶TPH-1对胃保护措施起决定性效用，也许作为化疗CKD的潜在化疗靶点。

完整不止处：

Ward NP, Kang YP, Falzone A, Boyle TA, DeNicola GM. Nicotinamide nucleotide transhydrogenase regulates mitochondrial metabolism in NSCLC through maintenance of Fe-S protein function.J Exp Med (IF: 10.892). 2020 Jun 1;217(6):e20191689. doi: 10.1084/jem.20191689.